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TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

KOD DNA polymerase具有強(qiáng)力的3’→5’核酸外切酶活性（校正活性），可準(zhǔn)確地對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，作為克隆用PCR酶獲得了廣泛的好評(píng)。然而，高保真性PCR酶在20?30循環(huán)以后，容易出現(xiàn)擴(kuò)增無(wú)法持續(xù)的<停滯現(xiàn)象>。KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶：KOD -Plus-系列技術(shù)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用了本公司新開(kāi)發(fā)的「延伸增強(qiáng)劑」，保持了KOD -Plus-系列高保真性（約為Taq的80倍）的同時(shí)，通過(guò)抑制<停滯現(xiàn)象>，明顯提高了對(duì)微量模板DNA、長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增效率。

TOYOBO東洋紡KOD -Plus- Neo高速PCR酶

特征：

特征1.　可對(duì)微量模板DNA進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增
通過(guò)應(yīng)用延伸增強(qiáng)劑技術(shù)，即便是微量模板DNA也可對(duì)目的基因進(jìn)行高保真?高效率的擴(kuò)增。同時(shí)本酶具備高保真性（約為Taq的80倍），可準(zhǔn)確地對(duì)低拷貝數(shù)模板的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。
此外，由于使用抗體的熱啟動(dòng)法，因此可進(jìn)行特異性良好的擴(kuò)增。

特征2.　縮短了延伸時(shí)間<30sec./kb>　（長(zhǎng)目的片段更方便）
延伸時(shí)間從原產(chǎn)品的60sec./kb縮短到30sec./1kb。對(duì)長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增更加方便。

特征3.　實(shí)現(xiàn)了各種引物同一循環(huán)條件
通過(guò)對(duì)反應(yīng)Buffer組成的zui適化，與原來(lái)的KOD DNA polymerase相比，延伸性?擴(kuò)增效率有了大幅的提升。
實(shí)現(xiàn)了無(wú)需探討循環(huán)條件。20mer以上的引物(Tm值>63℃)可先嘗試2步法。無(wú)需探討非常簡(jiǎn)便。
*Tm值采用zui鄰近法(Nearest Neighbor method)計(jì)算得到的值。

特征4.　長(zhǎng)目的片段的擴(kuò)增
提高了延伸性，可對(duì)各種長(zhǎng)度的目的片段進(jìn)行擴(kuò)增。已通過(guò)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)可對(duì)24kb的基因組DNA 進(jìn)行擴(kuò)增。

實(shí)驗(yàn)例

實(shí)驗(yàn)例1. 對(duì)來(lái)自Total RNA的各種基因全長(zhǎng)ORF的擴(kuò)增
實(shí)驗(yàn)例2. 微量Template的擴(kuò)增
實(shí)驗(yàn)例3. 各種長(zhǎng)度目的片段的擴(kuò)增效率?延伸性的比較

簡(jiǎn)要備注

＜幾點(diǎn)建議＞
●PCR產(chǎn)物的克隆
由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，可用平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。此時(shí)，如已對(duì)載體進(jìn)行了脫磷酸化處理，就需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行磷酸化，或使用帶5'磷酸基的引物?！×硗?，由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，不能直接進(jìn)行TA克隆。可使用按以下方法開(kāi)發(fā)的TA克隆試劑盒「TArget Clone -Plus-」。

*包含于TArget Clone -Plus-(Code No. TAK-201)中。
**推薦使用Ligation high Ver.2 (Code No. LGK-201)。
 

＜注意＞
●引物的設(shè)計(jì)
3'端有錯(cuò)配的引物，可能會(huì)受本酶校正。

簡(jiǎn)要備注① 關(guān)于Polymerase
應(yīng)用于PCR的DNA polymerase大致可分為2大類。一類是從嗜熱菌中分離出來(lái)的被稱為polⅠ型的聚合酶，以Taq、Tth　DNA polymerase為代表。另一類是從超嗜熱Archaea中分離出來(lái)的被稱為α型的聚合酶，KOD、Pfu DNA polymerase屬于該類。α型酶具有polⅠ型酶所沒(méi)有的3'→5核酸外切酶活性。該活性被稱為Proof-reading（校正）活性，與PCR的保真性有著非常深厚的淵源。KOD DNA polymerase利用該Proof-reading活性，表現(xiàn)出很高的保真性。但具備該活性的酶一般被認(rèn)為對(duì)PCR反應(yīng)效率有不好的影響。KOD -Plus- Neo通過(guò)應(yīng)用新的延伸增強(qiáng)劑、熱啟動(dòng)法、以及Buffer組分的改良，大大提高了PCR效率。

Memo②　什么是熱啟動(dòng)？
在室溫條件下配制PCR反應(yīng)溶液時(shí)，配制過(guò)程中聚合酶會(huì)開(kāi)始反應(yīng)。在室溫下由于引物的特異性降低，很容易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)等副反應(yīng)。另外，KOD DNA polymerase具有很強(qiáng)的3'→5'核酸外切酶活性(Proof reading活性)，這也是產(chǎn)生副反應(yīng)的原因之一。熱啟動(dòng)法是指在高溫階段，激活聚合酶活性的方法，迄今為止已有好多種方法。其中zui嚴(yán)格的是使用中和抗體的方法。
KOD -Plus- Neo中由于混合了兩種抗Taq DNA polymerase抗體，在常溫狀態(tài)下可*抑制聚合酶的活性及校正活性。而該抑制作用在PCR的預(yù)變性階段*失活，對(duì)PCR沒(méi)有任何影響。

訂購(gòu)信息：

20U（20次用） 貨號(hào)：KOD-401S

200U（200次用）  貨號(hào)：KOD-401

200U*5支（1000次用） 貨號(hào)：KOD-401B

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